Immunohistological staining of the vitreous

Background: Immunohistological staining of the vitreous is difficult because of its high water content. We present a method for immunohistological staining of celloidin-embedded eyes. Results from diabetic and non-diabetic eyes are demonstrated.

Method: Diabetic and non-diabetic eyes were firstly immersed in formol and then slowly dehydrated using rising concentrations of glycerine (sink method). Subsequently, the whole globe was embedded in celloidin and cut into 200-μm sections. Control areas of interest were dissected from the 200 μm sections under a lightmicroscope. These specimens were then embedded in paraffin and cut into 7-μm sections. The 7-μm sections were immunohistochemically stained for type I-collagen, type IV-collagen, fibronectin and laminin.

Results: This method makes immunohistochemical staining of the vitreous possible. Type IV collagen, laminin and fibronection were found at higher concentrations in diabetic eyes than in normal eyes. Type I collagen was detected in neither diabetic nor in normal eyes.

Conclusions: Our method of examination allows immunohistological staining of the vitreous in its place of origin. Although our method is time consuming, it has some advantages over biochemical analysis: Even minimal changes and their exact distribution can be detected. Our first results show that the vitreous is built up inhomogeneously and that pathological influence can cause structural changes.

Hintergrund: Die immunhistologische Untersuchung des Glaskörpers ist wegen seines hohen Wassergehalts schwierig durchzuführen. Wir stellen in Erweiterung der Zelloidineinbettungsmethode erste immunhistologische Präparate von diabetisch veränderten und gesunden Augen vor.

Methode: Diabetisch veränderte und nichtdiabetische Bulbi wurden primär in gepuffertem Formol konserviert. Im Verlauf von Monaten erfolgte daraufhin die langsame Dehydrierung mittels ansteigender Konzentrationen von Glyzerin. Der Einbettung in Zelloidin schloß sich die Anfertigung von 200-μm-Schnitten an. Aus diesen wurden unter lichtmikroskopischer Sicht interessierende Areale herausgeschnitten und in Paraffin umgebettet. 7-μm-Schnitte wurden angefertigt und diese immunhistochemisch angefärbt. Untersucht wurde die Anfärbbarkeit von Kollagen Typ I, Kollagen Typ IV, Laminin und Fibronektin.

Ergebnisse: Mittels dieser Methode ist die immunhistologische Untersuchung des Glaskörpers möglich. Typ-IV- Kollagen, Laminin und Fibronektin sind beim Diabetiker deutlich vermehrt nachweisbar. Typ-I-Kollagen war bei diabetischen und gesunden Augen nicht nachweisbar.

Schlußfolgerung: Unsere Methode bietet die Möglichkeit der immunhistologischen Untersuchung des Glaskörpers im Gewebeverband. Trotz des großen methodischen Aufwands bestehen gegenüber quantitativen biochemischen Analysen erhebliche Vorteile: Auch geringe Veränderungen können in ihrer räumlichen Verteilung wahrgenommen werden. Die ersten Ergebnisse zeigen, daß der Glaskörper je nach Lokalisation inhomogen aufgebaut ist und unter pathologischen Einflüssen in bestimmten Gebieten strukturelle Veränderungen aufweist.